Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) on immunoloogialaboris tehtud test, et määrata valgu taset bioloogilises proovis. ELISA tuvastamine viitab testi viimasele etapile, mille käigus selge lahus või substraat lisatakse plastplaadile, mis sisaldab seotud ensüümiga märgistatud antikeha. Ensüüm lõhustab substraadi ja toimub värvimuutus. Seejärel mõõdetakse lõpliku värvilise lahuse valguse neeldumist ELISA plaadilugeja või spektrofotomeetriga.
ELISA-teste on erinevat tüüpi, millest kaks levinumat on kaudne ELISA ja püüdmis- ehk sandwich-ELISA. Kaudset ELISA-d kasutatakse antikehana tuntud valgu tuvastamiseks patsiendi seerumis. Kaudse ELISA testi näiteks on inimese immuunpuudulikkuse viiruse (HIV) test, mida kasutatakse HIV-vastaste antikehade tuvastamiseks. Sandwich ELISA test tuvastab valgu või antigeeni, püüdes selle kahe antikeha vahele. Hormooni inimese kooriongonadotropiini (hCG) tuvastamine, mis on raseduse ajal kõrgenenud, tehakse võileiva ELISA testiga.
Mõlemal testil on testi lõpus ELISA tuvastamise etapp. See etapp hõlmab antikeha lisamist, mille külge on kinnitatud ensüümi molekul. Pärast ensüümiga märgistatud antikeha lisamist lisatakse sellele ensüümile spetsiifilist substraadi molekuli sisaldav värvitu lahus. Ensüüm lõhustab substraadi molekuli ja lahuse värvus muutub sõltuvalt kasutatavast kombinatsioonist. Patsiendi proovis sisalduva antikeha või antigeeni koguse määramine toimub värvimuutuse intensiivsuse mõõtmise teel.
ELISA tuvastamisetapis kasutamiseks on saadaval mitu ensüümi substraadi kombinatsiooni. Kõige tavalisem ensüüm on mädarõika peroksidaas (HRP), mis võib muu hulgas lõhustada substraadi molekule orto-fenüleendiamiindivesinikkloriidi (OPD) ja tetrametüülbensidiini (TMB). Nii OPD kui ka TMB lõhustamine annab kollase värvuse ja nende substraatide optilist tihedust või valguse neeldumist mõõdetakse ELISA plaadilugejaga. OPD valguse neeldumist mõõdetakse lainepikkusel 490 nanomeetrit (nm), samas kui TMB mõõdetakse 450 nm juures.
Teine levinud ELISA tuvastamisetapis kasutatav ensüüm on aluseline fosfataas. Seda ensüümi kasutatakse koos substraadiga p-nitrofenüülfosfaat (PNPP) ja see annab ka kollase lahuse. PNPP neelab valgust lainepikkusel 405 nm.
Ensüüm-substraatide kombinatsioonide valik põhineb tavaliselt sellel, millised ensüümiga märgistatud antikehad on kaubanduslikult saadaval, samuti millistel seadmetel valguse neeldumise mõõtmiseks kasutatakse. ELISA tuvastamiseks saadaolevad paljud kombinatsioonid muudavad ELISA testi väga mitmekülgseks. See on oluline vahend haiguste testimisel ja uurimislaborites.