DNA kodeerib kõiki ühe organismi tunnuseid. Teatud DNA nukleotiidide kombinatsioonid loovad erinevad genotüübid või tunnuste paarid. Genotüübis esindatud tunnused võivad olla domineerivad või retsessiivsed ning määravad, kuidas organism seda tunnust väljendab. Genotüübi määramiseks võite kasutada Punnetti ruutu. Kui töötate arenenumas laboris, saate olemasolevate genotüüpide määramiseks kasutada analüütilisi meetodeid, nagu PCR-analüüs ja nukleiinhapete hübridisatsioon.
1
Joonistage 2×2 ruut. Punnetti ruutu kasutatakse järglase genotüübi tõenäosuse määramiseks tema vanemate genotüüpide põhjal. Ruut märgistatakse iga vanema genotüübiga. Väljaku piires näidatakse järglaste võimalikke genotüüpe.
2
Märgistage vasak pool. Võtke ühe vanema genotüüp ja jagage kaks tähte (mis esindavad domineerivaid ja retsessiivseid tunnuseid). Asetage üks täht ülemisest reast vasakule ja üks täht alumisest reast vasakule. See esindab selle vanema panust järglase genotüüpi. Kui need kaks tunnust on erinevad, on tavaks panna ülemisse ritta domineeriv tunnus (suurtäht) ja alumisele reale retsessiivne tunnus (väiketäht).
3
Märgistage ülemine osa. Teise vanema omadused tuleks samamoodi jagada. Seekord asetage üks täht vasakpoolse veeru kohale ja teine parempoolse veeru kohale. See tähistab teise vanema panust järglase genotüüpi. Kui need kaks tunnust on erinevad, on tavaks panna vasakule domineeriv tunnus (suurtäht) ja paremale retsessiivne tunnus (väiketäht).
4
Sisestage teadaolev teave. Nüüd saab iga ruudu täita. Kirjutage iga ruudu sisse täht, mis vastab reale, milles ruut asub. Järgmiseks kirjutage täht, mis vastab veerule, milles ruut asub. See tuvastab järglaste kõik võimalikud genotüübid ja nende protsendi. Segatunnuste korral kirjutage genotüüp nii, et domineeriv tunnus oleks loetletud esimesena (rR asemel Rr).
5
Valige praimer. Praimer on molekul, mis seondub teatud DNA järjestusega. Kui see on seotud, saab sideainet tuvastada, et teha kindlaks, kas see järjestus oli proovis või mitte. See võimaldab testida spetsiifilisi järjestusi, mis vastavad teatud genotüübile.
6
Koguge DNA proov. Kui olete valinud praimeri, mis seondub kõnealuse järjestusega, peate eraldama rakust DNA. Järgige oma labori jaoks sobivat ekstraheerimisprotokolli. Kui olete proovi kogunud, saate seda testida.
7
Lisage proovile praimer. Lisage praimer DNA proovile. Kui sellele praimerile vastav järjestus on olemas, seostub see molekuliga. Kui see on lõpule viidud, võite minna analüüsi juurde.
8
Analüüsige tulemusi. Lihtsate juhtumite puhul on tulemused lihtsalt positiivsed või negatiivsed, sõltuvalt sellest, kas praimer oli DNA ahelatega seotud või mitte. Mõned keerulisemad meetodid võivad nõuda PCR-järgseid protseduure. Need protseduurid võivad olla pikad ja kulukad ning võimalusel neid välditakse.
9
Seedige DNA proov. DNA seedimine on protsess, mis lõhub kaks DNA ahelat. See jätab iga ahela ilma täiendava aluspaarita. See ava võimaldab DNA-l seonduda teiste komplementaarsete ahelatega.
10
Eraldage fragmendid elektroforeesi abil. Elektroforees on protsess, mis kasutab elektrivoolu molekulide kandmiseks läbi geeli. Sel juhul peaksite kasutama agaroosigeeli. DNA liigub geeli positiivse otsa poole ja eraldatakse suuruse järgi.
11
Kandke nailon- või nitrotselluloospaberile. Kui kiud on eraldatud, tuleb need geelist välja viia. Proovi kandmiseks nailon- või nitrotselluloospaberilehele kasutage Southerni ülekandeprotseduuri. Need kandjad on sondi lisamiseks sobivamad.
12
Lisage sond. Sondid on DNA ahelad, mis täiendavad kõnealuseid ahelaid. Kui konkreetset genotüüpi esindav ahel on olemas, seob see sondi. Sond sisaldab ka fluorestseeruvat molekuli, mis on analüüsi käigus tuvastatav.
13
Pese paberit. Kui olete andnud piisavalt aega, et sond saaks olemasoleva prooviga seonduda, peate paberit pesema. Järgige oma labori konkreetseid protseduure, kuid tavaliselt tuleb paberit kergelt veega loputada. Olge ettevaatlik, et mitte saastada ega kahjustada proovi pesu ajal.
14
Avage paber. Kui proov on pestud, saate seda uurida. Proovi kokkupuude ultraviolettvalgusega ergastab sondi külge kinnitatud fluorofoori. See loob pildi, millel on tausta suhtes intensiivse valgusega alad. Kui sondi pole, pole ka valgustatud alasid. Sondi olemasolu näitab, et kõnealusele genotüübile vastav järjestus on olemas.