Ubikvitineerimine viitab valgu ubikvitiini seondumisele teiste valkudega kolme erineva ensüümi poolt. Ubikvitinatsiooni test on test, mis määrab, kui suur osa sellest protsessist rakus toimub. Testidega saab määrata, kuidas erinevad tingimused mõjutavad valkude seondumist, ubikvitinatsiooni rajal olulisi samme ja struktuure ning valgu hulka rakus. Ebapiisavaid või liigseid koguseid on seostatud paljude erinevate haiguste tekkega.
Rakkudes leiduv valk, ubikvitiini ülesanne on seonduda valkudega, toimides samal ajal “märgisena” või signaalina teistele struktuuridele. See “silt” annab seejärel ensüümidele märku, et valku saab hävitada, ringlusse võtta või teisaldada. Tulemuseks on valkude hävitamine või transportimine.
Need märgistusvalgud on olulised DNA parandamise, viirusnakkuste ja immuunvastuse jaoks. Teised olulised funktsioonid hõlmavad rolli rakusurmas, rakkude jagunemises ja rakkude arengus. Liiga palju ubikvitiini või selle puudumine võib mängida rolli paljude haiguste, näiteks vähi, geneetiliste häirete ja immuunsüsteemi haiguste tekkes.
Teadlased kasutavad ubikvitinatsiooni testi, et teha kindlaks, millised tingimused muudavad valgu kontsentratsiooni rakus, ja võrrelda haigeid rakke tervete rakkudega. Teadlased kasutavad seda ka selleks, et uurida, millised tingimused põhjustavad muutusi sidumises. Lisaks võivad nad proovida siduda spetsiifilist DNA koodi rakus olevate ensüümide hulgaga.
Teadlased kasutavad spetsiaalselt rohkem kui ühte tüüpi ubikvitinatsioonianalüüse. Määratakse ubikvintiiniga seotud valkude protsent. Teine uurib ensüümide aktiivsust või muude ubikvinatsioonirajas leiduvate vaheühendite olemasolu. Erinevad analüüsid töötatakse välja sihtvalgu alusel, millega ubikvitiin seondub.
Ubikvitinatsioonianalüüsi aluseks on ühend, mis on märgistatud mõne muu kergesti mõõdetava kemikaaliga. Onkoloogilistes analüüsides saab ubikvitiini märgistada krüptaadiga, ühendiga, mis sisaldab kahte lämmastikuaatomit. Selle abil saab määrata, milline ensüüm on rakus kõige aktiivsem.
Ubikvitinatsioonianalüüs koosneb kahest etapist. Esimene on ensümaatiline etapp, kus ensüümid seovad märgistatud ubikvitiini sihtvalguga. Teine on tuvastamisetapp, mille käigus uuritakse sihtvalgu seondumist, kasutades konjugaati, näiteks antikeha. Antikeha fluorestseerub või muudab värvi, mis võimaldab teadlasel määrata ensüümide aktiivsust.