Farmatseudid ja keemikud puutuvad oma töös kokku paljude looduslikult esinevate orgaaniliste segudega ja keemiliste reaktsioonide segudega. Sellisena on kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia (HPLC) süsteem iga labori jaoks üks olulisemaid instrumente. HPLC seade võimaldab neid segusid eraldada ja analüüsida (kvantitatiivselt ja kvalitatiivselt). Seda tüüpi kolonnkromatograafias on statsionaarse faasi osakeste suurus piisavalt väike, et see raskendab lahusti läbimist; selle ületamiseks rakendatakse kõrget rõhku 3000-5000 psi. See on kõige tundlikum, tõhusam ja täpsem tehnika.
1
Järgige eeskirju ja eeskirju ning kandke põlle. Puhastage HPLC. Lülitage see sisse ja oodake, kuni see käivitub. Valmistage instrument analüüsiks ette. Hoidke lahustit/lahusteid liikuvas faasis lahustimahutis või lahustisalves. Segu komponentide eraldamiseks kasutatakse lahustit. Kaasaegsetes instrumentides saab lahustite segu kasutada liikuva faasina, mida nimetatakse gradientelueerimiseks. Elueerimine on lahutamine komponentideks. Kasutage lahustina metanooli-vett või kloroformi-heptaani jne.
2
Valige HPLC tüübid faaside suhtelise polaarsuse alusel: Normaalfaas: normaalfaasi HPLC tegemisel kasutage võrdlevat polaarset statsionaarset faasi kui liikuvat faasi. Pöördfaasi HPLC: kasutage liikuva faasiga võrreldes vähem polaarset statsionaarset faasi. Tavaliselt kasutatakse pöördfaasi.
3
Sisestage andmed süsteemi või programmeerige HPLC. Määrake number lahustitele, kui valite gradientelueerimise. Määrake voolukiirus. Reguleerige pumba rõhku.
4
Analüüsige oma proovi. Lisage proov pihustisüsteemi. See on mehhanism, mis juhib proovi (eraldatava segu) süsteemi. Laadige statsionaarne faas kolonni. Käivitage HPLC, klõpsates sellega ühendatud arvuti ekraanil nuppu Start. Oodake mõnda aega, kuni segu jagamine komponentideks. Retentsiooniaeg on aeg, mis lahustil kulub komponentide eraldamiseks, mis võrdub segu kolonni sisestamise ajaga kuni selle tuvastamiseni/analüüsimiseni.
5
Arendage oma komponente. Oodake, kuni segu on koostisosadeks jagatud. Seda nimetatakse arendamiseks, kui proovi sisu tuvastab detektor.
6
Jälgige tulemust. Vaadake tuvastatud ja graafikule salvestatud komponentide eraldamist. Komponentidele ja nende kontsentratsioonile vastavad erinevad piigid.
7
Rakendage oma leide oma töös. HPLC-d kasutatakse palju farmaatsias, keemias ja sellistes tööstusharudes nagu toiduainete tootmine. Mõned olulised rakendused on järgmised.Kasutage seda kvalitatiivseks analüüsiks, võrreldes identsetes tingimustes täheldatud retentsiooniaega.Kasutage HPLC-d kvantitatiivseks analüüsiks, näiteks komponentide kontsentratsiooni hindamiseks.Analüüsige lipiidide eraldumist.Kasutage seda kriminaalasjade kohtuekspertiisi töös vastuste saamiseks. /mürgijuhtumid.