Looduses leidub baktereid praktiliselt igal kujuteldaval pinnal ja kahjuks leidub neid harva üksikutes bakteriliikides isoleeritud populatsioonides. See esitab mikrobioloogidele huvitava väljakutse saada isoleeritud bakterikolooniaid nii lihtsa kui ka kiire meetodiga. Kolmesektoriline vööt või tavaliselt viidatud kui “T-Streak” on põhiline, kuid siiski ülioluline oskus, mida mikrobioloogid kasutavad igapäevaselt bakterikolooniate isoleerimiseks, tuvastamiseks ja uurimiseks.
1
Pöörake agarit sisaldava steriilse Petri tassi tagaküljele. Joonistage joon, mis algab veidi keskpunktist kõrgemal. Jätkake joone tõmbamist, kuni tabate tagaplaadi serva.
2
Tõmmake teine joon, alustades tagaplaadi vasakust servast, kuni tabate teist külge. See uus sirge peaks olema algse sirgega risti, lõikuma sellega alguspunktis. Petri tassi tagaplaat tuleks nüüd jagada kolmeks sektoriks, mis kuvatakse suure tähena “Tâ€.
3
Märgistage Petri tassi tagaplaat asjakohase laboratoorse teabega, nagu teie initsiaalid, kuupäev, kellaaeg ja kultuuri allikas.
4
Alustuseks ühendage Bunseni põleti kütuseallikaga ja süütage see.
5
Sisestage silmus vertikaalse nurga all leegi sisse. Eesmärk on, et inokulatsioonisilmus oleks veidi leegi sisemisest sinisest koonusest kõrgemal. Hoidke seda seal mitu sekundit.
6
Eemaldage silmus leegist. Sel hetkel on silmus steriilne ja äärmiselt kuum. Inokulatsioonisilmus tuleb jahutada, vastasel juhul tapab jääksoojus kõik kultuurist võetud bakterid.
7
Jahutage inokuleerimissilmust. Tõstke Petri tassi kaant täpselt nii palju üles, et silmus sisestada. Puudutage toitaineagari välisserva. Esimesel kokkupuutel peaks kostma särisevat heli. Jätkake inokulatsiooniaasa hoidmist pinna vastu mitu sekundit.
8
Eemaldage Petri tassist inokulatsioonisilmus. Vältige siinkohal ühegi teise pinna puudutamist, kuna see saastab inokulatsioonisilmuse uuesti.
9
Hoidke steriilset inokulatsioonisilmust. Avage oma kultuuri allikas, näiteks puljongikultuur.
10
Sisestage silmus kultuuri, keerutades sisu, et tagada bakterite ühtlane jaotumine. Tehke seda mitu sekundit.
11
Eemaldage silmus ja taastage algne proov.
12
Valige proovi koloonia või osa.
13
Eemaldage agarplaadilt kate ja kraapige valitud proov inokulatsioonisilmusega üles.
14
Asetage plaadi kate tagasi.
15
Tõstke Petri tassi kaant täpselt nii palju üles, et silmus sisestada. Alustades tähe “T” ülemisest sektorist, lohistage inokulatsioonisilmust kergelt üle toitaineagari pinna siksakilise mustriga. Oluline on jääda sellesse piirkonda, kus te parasjagu inokuleerite.
16
Steriliseerige inokulatsioonisilmus uuesti nüüd, kui “T— esimene sektor on nakatatud. Järgige jaotises Inokulatsioonisilmuse steriliseerimine kirjeldatud meetodit. Ärge unustage jahutada inokulatsioonisilmust toitaineagari serval, mis ei ole saastunud algne kultuur!
17
Pöörake Petri tassi 90 kraadi ja tõstke kaant täpselt nii palju üles, et aas saaks sisestada.
18
Alusta esimesest sektorist. Lohistage inokulatsioonisilmust kergelt üle toitaineagari teise sektori poole.
19
Jätkake teise sektoriga. Lohistage inokulatsioonisilmust kergelt siksakiliselt üle toitaineagari.
20
Steriliseerige inokulatsioonisilmus uuesti nüüd, kui “T— teine sektor on nakatatud. Järgige jaotises Inokulatsioonisilmuse steriliseerimine kirjeldatud meetodit. Ärge unustage jahutada inokulatsioonisilmust toitaineagari serval, mis ei ole saastunud algne kultuur!
21
Pöörake Petri tassi 90 kraadi ja tõstke kaant täpselt nii palju üles, et aas saaks sisestada.
22
Alusta teisest sektorist. Lohistage inokulatsioonisilmust kergelt üle toitaineagari kolmanda sektori suunas.
23
Jätkake kolmandasse sektorisse. Lohistage inokulatsioonisilmust kergelt siksakiliselt üle toitaineagari.